Electroforesis Vertical SDS-PAGE

OBJETIVO

Adquirir conocimientos sobre como realizar correctamente una electroforesis vertical de SDS-PAGE.

MATERIALES

• Fuente de electroforesis
• Pipetas 
• Tampón de electroforesis
• Marcadores preteñidos de peso molecular
• Tampón de carga

PROCEDIMIENTO

1. Tras haber hecho los reactivos en la anterior práctica, añadimos tampón de carga a las muestras.

2. Colocamos los geles en el soporte de la cubeta y añadimos el tampón.

3. Mientras preparamos la cubeta con el tampón, ponemos a calentar agua en un vaso de precipitados, lo tapamos con papel de aluminio y metemos los tubos eppendorf para calentar la muestra durante un par de minutos.

4. Cogemos la pipeta y vamos cargando los pocillos con cuidado de no salirnos y romper el gel.

5. Cargamos el gel, mientras vamos anotando qué estamos cargando en cada pocillo.

6. Una vez cargado conectamos el gel a la fuente de alimentación y lo ponemos a 80 V y después lo subimos a 120 V.

7. Cuando la escalera haya corrido más de la mitad del gel ( unas dos horas y cuarto) apagamos la corriente.

8. Separamos las placas de vidrio con ayuda de una espátula para sacar el gel, con cuidado de no invertir su orientación. 

9. Una vez finalizada la transferencia, se tiñe el gel de electroforesis mediante su inclusión en solución de tinción que contiene Azul de Coomassie, ácido acético glacial e isopropanol, durante 2 horas a temperatura ambiente. 

10. Posteriormente, se pasa el gel a solución de distinción que contiene ácido acético 8% y etanol 25% en agua, destiñendo el gel durante toda la noche.

Resultado de electroforesis

OBSERVACIONES

La mayoría de las proteínas de suero se han quedado muy cerca del pocillo, por lo se debería habe dejado más tiempo o usado un gel de concentración menor.