Filtración

OBJETIVO

Entender a través de una práctica el procedimiento de las operaciones de filtrado parándonos a comprender las propiedades que nos permiten realizar un filtrado.

MATERIAL

• Papel de filtro
• Filtro de membrana esterilizante
• Sistema de vacío (bomba de vacío)
• Embudo
• Vaso de precipitados o matraz elenmeyer
• Matraz Kitasato
• Disolución de agua y café
• Agua destilada
• Café
• Embudo Buchner
• Parafilm
• Sistema de vacío

PROCEDIMIENTO

- Filtro liso:

1. Dibujamos un círculo con papel de filtro, del tamaño de la boca de el embudo, para que se acople bien.

2. Colocamos el embudo en el matraz y ponemos el filtro que hemos hecho, lo humedecemos para que se adhiera un poco al embudo.

3. Vamos añadiendo la disolución de agua y café.

- Filtro con pliegues:

1. Como en el caso de filtro liso, recortamos el redondel para luego colocarlo en un embudo, pero esta vez dejaremos cierta anchura de más por que le vamos a hacer.
2.  Colocamos el embudo en el matraz y ponemos el filtro que hemos hecho, lo humedecemos para que se adhiera un poco al embudo.
3. Vamos añadiendo la disolución de cafe y agua.

- Filtración por vacío:
1. Preparamos el matraz Kitasato, acoplándolo al sistema de vacío a través de una goma, colocamos otro Kitasato, por si algo de líquido pasara por la goma que no llegue a la bomba y no se rompa.
2. El embudo Buchner se une al matraz con un tapón para impedir la entrada de aire y que funcione bien el vacío.
3. Colocamos el embudo Buchner con un filtro de membrana en el fondo y lo humedecemos.
4. Vamos añadiendo la disolución de cafe y agua.

OBSERVACIONES

Siempre que filtremos tenemos que tener en cuenta que hay que añadir la disolución lentamente para evitar que el filtro se colmate y que esto nos impida continuar con la filtración.

Cuando queremos filtrar más rápidamente usamos el filtro de pliegues debido a que tiene más superficie de filtrado.
En nuestro caso hemos puesto Parafilm cuando se trata de la filtración Kitasato en las uniones para evitar la entrada de aire, además aquí tenemos que tener especial cuidado a lla hora de no colmatar el filtro, ya que a parte de ser la filtración más rápida es la más propensa a colmatarse.
También es interesante decir que al realizar la filtración de el café al vacío y el agua se filtró previamente, ya que los granos de café son demasiado grandes para este tipo de filtros.

Disoluciones y Diluciones

OBJETIVO

Utilizar un protocolo de trabajo para hacer disoluciones , calcular la molaridad y porcentaje peso/volumen de una disolución , realizar diluciones y calcular la nueva concentración así como realizar también diluciones seriadas.

MATERIAL

• Balanza digital
• Vidrios de reloj
• Papel de pesada
• Tubos de ensayo
• Pipetas graduadas y aforadas
• Pipetas automáticas
• Puntas de pipeta
• Prepipetas
• Matraces aforados de diferentes volúmenes
• Probetas de distinta capacidad
• Vaso de precipitado con agua destilada
• Sal de mesa
• Pipeta pasteur

PARTE 1

Preparamos una disolución de CINa 2M con un volumen final de 250mL y sabiendo que la sal cde mesa común que vamos a usar contiene un 95% de pureza de NaCl, realizamos los cálculos aplicando la fórmula de la molaridad y resolvemos que:

• Tenemos que pesar 30.78g de sal
• Primero hacemos los cálculos usando la fórmula de la molaridad, el resultado serán gramos puros, entonces habrá que añadirle las impurezas de la sal de mesa. A continuación cogemos un matraz aforado de 250 mL y casi lo llenamos de agua, digo casi por que tenemos que dejar un margen para luego enrasar bien, entonces añadimos la sal y enrasamos con una pasteur.
• La concentración en peso/volumen de la disolución es 12.31
  
  
  

  

  Le añadimos colorante para visalizar mejor el proceso de disolución de acontinuación

PARTE 2

Preparamos 50mL de una disolución 200nM de CIN a partir de la solución madre o stock 2M que preparamos en la parte 1 de la práctica.

Observación de Preparaciones

OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es seguir familiarizándonos con los microscopios en este caso observando nuestras células de el epitelio bucal, como también preparaciones de células de lengua, pulmón, oreja, y piel de cerdo.

MATERIALES

• Microscopio
• Palillos
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Mechero
• Colorante: azul de metileno
• Células de mucosa bucal

PROCEDIMIENTO

1. Para adquirir nuestras células epiteliales de la mucosa bucal raspamos con cuidado nuestra cara interna de la mejilla y extendemos el material obtenido en un portaobjetos.
2. Fijamos la preparación calentándola a la llama de un mechero hasta que se seque la muestra. Hay que prestar atención a calentar por el lado del portaobjetos y no en el lado donde hemos extendido las células de la mucosa.
3. Puesto que las células son transparentes procederemos a teñirlas, añadiendo 2 o 3 gotitas de colorante (azul de metileno) y esperamos unos minutos.
4. Retiramos el exceso de colorante con agua, controlando que no ejerza demasiada fuerza sobre la muestra así que el chorrillo ha de ser flojo.
5. Colocamos el cubreobjetos encima.
6. Observamos la preparación y las preparaciones del cerdo. 



Células de nuestra mucosa bucal






Células de la oreja del cerdo

Microscopio

OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es conocer más el microscopio, ya que es un instrumento básico cuando se trabaja con microorganismos, células en cultivo, etc.

Hay varios tipos de microscopios, en esta práctica se utilizará el microscopio compuesto.

El microscopio al aumentar la imagen de los objetos, nos permite analizar la estructura, la luz y la forma de diferentes tipos de muestra, en esta práctica observaremos un hilo, un pelo y en un frasco hace una semana se introdujo agua y un poco de tierra con el fin de que proliferaran microorganismos y se pudiesen ver hoy.

CUIDADOS DEL MICROSCOPIO

Debemos tener en cuenta un par de precauciones básicas:

• Transporta siempre el microscopio con las dos manos
• Sitúa el microscopio a unos 10 o 15 centímetros de la mesa o poyata 
• Si es necesario limpia las lentes del del microscopio, sólo con papel y solución destinada para eso
• Cuando termines de trabajar mueve el revolver del microscopio en la posición de menos resolución

PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

MATERIALES

• Microscopio compuesto
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Goteros o pipetas pasteur
• Hilo para coser
• Frasco para observar

PROCEDIMIENTO

• Preparación de la muestra temporal:

1. Toma un cubreobjetos y un portaobjetos sobre la mesa. Se comprueba que estén limpios.
2. Se sitúa con cuidado el portaobjetos sobre la mesa y coloca la muestra (hilo, pelo o agua del frasco) en el centro del portaobjetos.
3. Dejamos caer una gota de agua limpia sobre la muestra (en la de agua del frasco este paso no es necesario).
4. Colocamos el cubreobjetos sobre el portaobjetos formando un ángulo de 45º, y dejamos caer lentamente, comprobando que el líquido se desplace lentamente entre ambos cristales y se evite la formación de burbujas.

• Observación de la muestra:

1. Colocamos el porta sobre la platina de tal manera que quede bien ajustada.
2. Enfocamos con el objetivo de menor aumento utilizando el tornillo macromético, con el tornillo macrométrico se baja completamente el tubo del microscopio hasta que llegue al tope.
3. Observamos por el ocular.
4. Abrimos el diafragma hasta que se obtenga una buena iluminación de la muestra.
5. Con el tornillo macrométrico se sube lentamente el tubo hasta enfocar el objeto utilizando el tornillo micrométrico para obtener más nitidez.
6. Luego giramos lentamente el revólver para colocar el objetivo a mayor aumento. Utilizando el tornillo micrométrico para obtener una imagen nítida NO utilizar el tornillo macrométrico, por que si enfocaste correctamente con objetivos de menor aumento no volverás a necesitarlo. Si se requiere abre un poco el diafragma para aumentar la entrada de luz.
7. Cuando terminamos de observar la muestra, antes de sacar el porta objetos, giramos lentamente el revólver hasta el objetivo de menos aumento, ya podemos retirar la muestra.
8. Cuando terminemos de usar el microscopio ponemos el control de la luz en 0 y apagamos el microscopio, desconéctalo, enrollando el cordón y cubriéndolo con el cobertor plástico o caja. Guardamos el microscopio.

Limpieza y Mantenimiento de Equipos y Material de Laboratorio

OBJETIVO

En esta práctica hemos adquirido conocimientos sobre como debe ser la limpieza y mantenimiento de los diversos equipos y materiales de laboratorio. Nos hemos dividido en grupos para hacerlo, estas es la recopilación de todos los protocolos que hemos usado.

1. LA CENTRÍFUGA

MATERIALES

• Un paño  
• Agua 

• Jabón desinfectante 
• Un recipiente o cubeta 
• Gradilla 
• Secado con papel 
• Estufa 

PROCEDIMIENTO

1.Para un buena limpieza debemos de separar de nuestro equipo todas aquellas partes de el mismo que sean extraíbles, comprobaremos que el termociclador esté desenchufado de la corriente y procederemos a extraerlas.
2.Dichas partes se sumergirán en una cubeta con agua y jabón, en nuestro caso sumergiremos los tubos de el termociclador que van dentro de los pocillos de este. 

 

3.Las dejaremos ahí unos minutos mientras que con el paño húmedo y con un poco de jabón limpiamos la superficie de el termociclador bien, así como la tapa y el interior, después lo secamos con papel. 

4.Sacaremos los tubos de la cubeta y los enjuagaremos tres veces secándolos después con papel, y los iremos colocando correctamente en vertical en una gradilla limpia. La gradilla con los tubos se introducirá en la estufa durante 10 min a 60 grados para el completo secado, el por que de que los tubos se sitúen en vertical en la gradilla es para que el calor entre en el tubo más fácilmente para un mejor resultado de secado. 

5.Por último añadiremos los tubos a los pocillos de la centrífuga, en nuestro caso antes de comenzar a colocar los tubos los pesemos en una balanza electrónica y los agrupemos por similitud en el peso para que la centrifuga se nos quede lo más equilibrada posible. 

2. BALANZAS

MATERIAL

- Paños
- Agua
- Jabón
- Papel
- Pincel

Limpieza y ordenación de área de balanzas

1. Ponerse los guantes y quitar todos los aparatos y utensilios del área de balanzas.

2. Coger un recipiente con agua y jabón, y un paño.

3. Sumergir el paño en el agua y escurrirlo un poco.

4. Darle a las superficies con el paño, frotando para quitar bien la suciedad.

5. Darle con otro paño para quitarle el jabón.

6. Secarlo bien con papel.

Limpieza de balanzas

1. Apagar y desenchufar las balanzas de la red eléctrica.

2. Limpiar con un pincel los restos.

3. Extraer el plato con cuidado, limpiarlo con un paño con agua y jabón muy bien escurrido, aclarar con otro paño y secarlo bien con papel.

4. Realizar el mismo proceso con las superficies externas de la balanza.

5. Colocar el plato en la balanza y cubrirla para protegerla del polvo.

Nivelado de balanzas

1. Mirar desde arriba la burbuja.

2. Girar las ruedas de debajo de la balanza hasta que la burbuja quede en el centro.

3. LIMPIEZA Y VERIFICACIÓN DE PIPETAS AUTOMÁTICAS

MATERIAL

• Bayetas
• Puntas de micropipeta
• Alcohol al 70%
• Papel de filtro para superficies
• Agua jabonosa
• Balanza

PROCEDIMIENTO - Limpieza:

1. Desalojar la superficie de trabajo, desinfectándola con alcohol de 70% y colocando sobre la superficie de trabajo uno o dos papeles de filtro para evitar riesgos en caso de derrame de alcohol 70%.

2. Utilizando bayetas estériles, damos un primer lavado a las micropipetas utilizando una loción alcohol 70%, impregnamos la bayeta con el alcohol y frotamos sobre las micropipetas, dando por todos los rincones de la misma, sin desarmarla.

3. Hacemos una disolución preparada con una proporción 1/10 de detergente en agua.

4. En un segundo lavado, utilizamos una loción de agua jabonosa y frotamos las micropipetas de la misma manera que lo hicimos con el alcohol 70%.

5. Damos un tercer lavado volviendo a frotar de nuevo con una bayeta impregnada con alcohol 70%, para dejarla desinfectada.

6. Una vez que hemos frotado la micropipeta con alcohol 70%, agua jabonosa y alcohol 70%, la depositamos en posición vertical en una gradilla para micropipetas automáticas.

7. Las gradillas de micropipetas automáticas deben ser limpiadas previamente con el mismo procedimiento que las micropipetas, antes de depositar las micropipetas, de lo contrario volveríamos a ensuciar las micropipetas si las depositamos limpias en gradillas sucias.

- Verificación:

1. Utilizamos una balanza electrónica, la cual hemos limpiado el plato previamente con un pincel para eliminar restos de sólidos que puedan quedar de pesadas anteriores.

2. Una vez limpio el plato de la balanza colocamos sobre él un vaso de precipitados de 100 mL, en el cual introducimos un papel de aluminio con forma de “cenicero” que contiene un trozo pequeño y doblado de papel de filtro, con el fin de que absorba el agua que vamos a añadir al papel de aluminio para la verificación de las micropipetas.

3. Con el vaso de precipitados, con el papel de aluminio y el papel de filtro dentro, taramos la balanza y comenzamos la verificación.

4. Pipeteamos agua destilada desde un vaso de precipitados de 50 mL y lo depositamos en el interior del vaso de precipitados que se encuentra sobre la balanza, de manera que nos indique la masa de la cantidad de agua depositada.Teniendo en cuenta que la densidad del agua destilada es 1, la masa indicada por la balanza coincidirá con el volumen que coge la micropipeta.

5. Realizamos este mismo procedimiento con todas las micropipetas, asegurándonos que la medida que indica la balanza no difiere de la que marca la micropipeta, seleccionando las micropipetas descartando las que de una medida errónea.

6. Cuando terminemos la verificación, limpiamos la balanza y el material utilizado, dejando en su lugar la gradilla con las micropipetas que han pasado satisfactoriamente la verificación.

OBSERVACIONES

Es muy importante cuando realicemos la limpieza que las bayetas que se utilizan para limpiar las micropipetas con alcohol 70% y agua jabonosa no estén empapadas, solo impregnadas.

4. RELLENO DE CAJAS DE PUNTAS

MATERIAL

• Alcohol de 70º
• Cinta de autoclave
• Guantes

PROCEDIMIENTO

1. Abrimos el envase de las puntas con los guantes puestos y se vierten las puntas, con cuidado de no tocar el interior de la bolsa.

sin tocar el interior de la bolsa, en la tapadera de la caja de puntas, se cogen de la parte más ancha para no contaminarlas de la punta; una vez rellena se cierra la caja y se precinta con una tira de cinta de autoclave, dejándole un pliegue para que luego sea más fácil retirarla. Cuando se ha autoclavado se mete en la estufa para que se terminen de secar las puntas y después se colocan en su sitio sin quitarle la cinta de autoclave para indicar que están estériles.

5. LIMPIEZA DE BAÑOS Y AGITADORES

MATERIAL

• Paños
• Pincel
• Agua jabonosa

PROCEDIMIENTO

- Limpieza del baño:

1. Primero debemos comprobar que esté desenchufado.

2. Desmontamos el aparato que va unido a la cubeta donde se vierte el agua

3. El aparato lo limpiamos con un paño húmedo y después se seca, si hay rincones inaccesibles para el trapo se puede usar un pincel.

4. Para limpiar la cubeta se utiliza agua jabonosa y un trapo, luego se seca.

5. Se monta el baño completo y se llena si se va a utilizar en el momento, sino se deja vacío y si no tiene tapa se cubre con papel de aluminio o algo para que no se llene de polvo o cualquier cosa que pueda caerle.

- Limpieza del agitador:

1. Comprobamos que esté desenchufado.

2. Lo limpiamos con un paño húmedo y desinfectante.

3. Secamos cuidadosamente.

6. AUTOCLAVADO DEL MATERIAL

MATERIAL

• Papel de aluminio 
• Cinta de autoclave

PROCEDIMIENTO

1. Envolvemos bien el material en papel de aluminio

2. En el caso de un matraz, se tapa solamente la apertura con una doble capa de papel de aluminio y se sella con la cinta de autoclave, o bien con un tapón especial para el matraz, haremos lo mismo en el caso de probetas y otros recipientes.

3. Para las pipetas, se enrollan en el papel de aluminio y se sellan en la parte de arriba y en medio para que el papel no se abra durante el proceso.

4. Después de preparar los materiales, se introducen en el autoclave y se programa el tiempo que se desee.

5. Cuando finalice tenemos que esperar a que baje la presión para poder sacar el material esterilizado.

7. SEÑALIZACIÓN

MATERIAL

• Impresión de señales de peligro
• Colores
• Tijeras
• Forro adhesivo

PROCEDIMIENTO

1. Una vez que tenemos impresas las señales de peligro, coloreamos cada una con los colores correspondientes, en este caso las de peligro biológico y riesgo eléctrico en amarillo y el resto en rojo.

2. Se recortan cuidadosamente.

3. Se plastifican con forro para protegerlas.